AxyPrep质粒DNA小量试剂盒
试剂盒组成、贮存、稳定性
RNase A：50mg/ml，室温可贮存6个月，长期贮存于-204℃。
Buffer S1：细菌悬浮液。加入RNase A后，混合均匀，4℃贮存。
Buffer S2：细菌裂解液（含SDS/NaOH）,室温密闭贮存。
Buffer S3：中和液，室温密闭贮存。
BufferW1：洗涤液，室温密闭贮存。
BufferW2 concentrate：去盐液。使用前，按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇。混合均匀，室温密闭贮存。
Eluent：2.5Mm Tris-HCl，PH8.5，室温密闭贮存。
注意事项
Buffer S2、Buffer S3和BufferW1含刺激性化合物，操作时要带乳胶手套和眼镜，避免沾染皮肤、眼睛和衣服，谨防吸入口鼻。若沾染皮肤、眼睛时，要立即用大量清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医疗咨询。
实验准备：
1. 第一次使用前，RNase A全部加入Buffer S1中，混合均匀，4℃贮存。
2. 准备无核酸和核酸酶污染的Tip头、离心管。
3. 第一次前，Buffer W2 concentrate中加入指定体积的无水乙醇。
4. 使用前，检查Buffer S2是否出现沉淀，应于37℃温浴加热溶解并冷却至室温后再使用。
操作步骤：
1. 取1-4ml在LB培养基中培养过夜的菌液（若使用丰富培养基，菌液体积应减半或更少），12，000×g离心1min，弃尽上清。
2. 加250μl Buffer S1悬浮细菌沉淀，悬浮需均匀，不应留有小的菌块。
☺ 确认Buffer S1中已加入RNase A。
3. 加250μl Buffer S2，温和并充分地上下翻转4-6次混合均匀使菌体充解，直至形成透亮的溶液。此步骤不宜超过5min。
☺ Buffer S2使用后立即盖紧瓶盖，以免空气中的CO2中和Buffer S2中的NaOH，降低溶菌效率。
☺ 避免剧烈摇晃，否则就导致基因组DNA的污染。
☺ 此步骤不宜超过5min。
4. 加350μl Buffer S3，温和并充分地上下翻转混合6-8次，12，000×g离心10min。
☺ 避免剧烈摇晃，否则将导致基因组DNA的污染。
5. 吸取步骤4中的离心上清并转移到制备管（置于2ml离心管（试剂盒内提供）中），12，000×g离心1min，弃滤液。
6. 将制备管置于回离心管，加500μl BufferW1，12，000×g离心1min，弃滤液。
7. 将制备管置于回离心管，加700μl BufferW2，12，000×g离心1min，弃滤液;以同样的方法再用700μl BufferW2洗涤一次。弃滤液。
☺ 确认在BufferW2 concentrate中已按试剂瓶上的指定体积加入无水乙醇。
☺ 两次使用BufferW2冲洗能确保盐份被完全清除，消除对酶切反应的影响。
8. 将制备管置于2ml离心管中，12，000×g离心1min。
9. 将制备管移入新的1.5ml离心管（试剂盒内提供）中，在制备管膜加60-80μl Eluent或去离子水，室温静置1min。12，000×g离心1min。
☺ 将Eluent或去离子水加热至65℃将提高洗脱效率。